DWD-1 เครื่องตรวจจับรังสีอัลตราไวโอเลต (ความยาวคลื่นคู่ลำแสงประสิทธิภาพสูง) การประมวลผลข้อมูลในตัว

ช่วงความยาวคลื่น: 254nm, 280nm (ตรวจจับพร้อมกัน), อื่น ๆ ระหว่าง 254nm, 280nm-400nm เส้นสเปกตรัมเลือกความยาวคลื่นสองตรวจจับพร้อมกัน

* คุณสมบัติของตราสาร DWD-1

โปรตีน 280nm / 254nm การวิเคราะห์ความยาวคลื่นคู่:

กรดอะมิโนอะโรมาติกเช่นไทโรซีนทริปโตเฟนที่มีพันธะคู่แบบคอนจูเกตในโมเลกุลโปรตีน พวกเขามีคุณสมบัติในการดูดซับแสงอัลตราไวโอเลตยอดการดูดซับอยู่ที่ความยาวคลื่น 280nm และค่าความหนาแน่นของแสงของยอดการดูดซับในช่วงความยาวคลื่นนี้เป็นสัดส่วนโดยตรงกับความเข้มข้น ดังนั้นจึงสามารถใช้เป็นพื้นฐานในการกำหนดคุณภาพและปริมาณของโปรตีน ด้วยเหตุนี้วิธีการดูดซับรังสีอัลตราไวโอเลตที่ 280nm มักใช้ในการตรวจสอบความเข้มข้นของโปรตีนอย่างต่อเนื่องในระบบโครมาโตกราฟิก แต่เนื่องจากปริมาณของไทโรซีนและทริปโตเฟนของโปรตีนต่าง ๆ แตกต่างกัน ดังนั้นเพื่อปริมาณที่แม่นยํา จําเป็นต้องใช้ผลิตภัณฑ์บริสุทธิ์ของโปรตีนที่ต้องวัดเพื่อเปรียบเทียบเป็นมาตรฐานหรือรู้ค่าสัมประสิทธิ์การสลายตัวของมันเป็นข้อมูลอ้างอิงแล้ว นอกจากนี้สารที่ไม่ใช่โปรตีนจำนวนมากยังมีความสามารถในการดูดซับคงที่ที่ความยาวคลื่น 280nm ซึ่งอาจเกิดการรบกวน โดยเฉพาะอย่างยิ่งผลกระทบของกรดนิวคลีอิก (purine และ pyrimidine-base) จะรุนแรงมากขึ้น การดูดซึมที่ 280nm นั้นแข็งแกร่งกว่าโปรตีน 10 เท่า (ต่อกรัม) แต่กรดนิวคลีอิกจะดูดซึมที่ 254nm ได้ดีกว่าและจุดสูงสุดของการดูดซึมอยู่ใกล้ 254nm ค่าสัมประสิทธิ์การสลายตัวที่ 254nm ของกรดนิวคลีอิกเป็น 2 เท่าของ 280nm

ในขณะที่โปรตีนตรงกันข้ามค่าการดูดซับรังสีอัลตราไวโอเลต 280nm มีค่ามากกว่าค่าดูดซึม 254nm

โดยทั่วไป：

อัตราส่วนการดูดซับแสงของโปรตีนบริสุทธิ์: A280 / A254 "1.8

อัตราส่วนการดูดซับแสงของกรดนิวคลีอิกบริสุทธิ์: A280 / A254 "0.5

ดังนั้นเมื่อมีกรดนิวคลีอิกพร้อม ๆ กันในสารละลายโปรตีน (ระบบชีวภาพส่วนใหญ่) OD254nm จะต้องตรวจสอบพร้อมกันกับ OD280nm จากนั้นแก้ไขด้วยสูตรเชิงประจักษ์เพื่อขจัดผลกระทบของกรดนิวคลีอิกเพื่อคํานวณปริมาณโปรตีนที่แท้จริงตามอัตราส่วนการดูดซึมของความยาวคลื่นทั้งสอง

ความเข้มข้นของโปรตีน = 1.45 × A280-0.74 × A254 (mg / ml)

สูตรเชิงประจักษ์นี้ถูกสร้างขึ้นโดยชุดของข้อมูลที่กำหนดโดยชุดของของเหลวผสมของโปรตีน (ยีสต์ enolase) และกรดนิวคลีอิก (ยีสต์กรดนิวคลีอิก) ในสัดส่วนความเข้มข้นที่แตกต่างกัน